Изучение перекрёстной реактивности специфических IgE к пищевым аллергенам класса LTP

Актуальность

Аллергические заболевания стали серьёзной проблемой человечества и по прогнозу ВОЗ в XXI веке выйдут на первое место по распространённости в структуре заболеваний. Сегодня Всемирная организация здравоохранения относит аллергию к шести наиболее часто встречающимся патологиям. Перекрёстная реактивность – явление, при котором иммунная система человека реагирует на схожие по пространственному и химическому строению вещества (аллергены). Это значительно расширяет спектр патогенных веществ.

Цель работы: исследование перекрёстной реактивности антител класса IgE из сывороток пациентов с пищевой аллергией к пищевым аллергенам Pru p 3 персика и Fra a 3 клубники методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Содержание работы

Для исследования был использован метод иммуноферментного анализа-В: лунки планшета сорбировали исследуемые аллергены Pru p 3 и Fra a 3, после чего осуществляли блокировку свободных сайтов связывания 2 %-ным раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА) в PBS. Затем исследуемые сыворотки людей инкубировали. После промывки добавляли вторичные антивидовые антитела против IgE человека, конъюгированные с пероксидазой. Данные регистрировали с помощью спектрофотометра.

Оснащение и оборудование, использованное при создании работы

96-луночный планшет (Corning, #3590).

Аллергены Pru p 3 и Fra a 3.

2 %-ный раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА, SERVA, #11930).

Исследуемые сыворотки людей (разведение 1:4 в PBS) – сыворотки пациентов Московского региона и сыворотки, предоставленные школьниками − участниками проекта.

PBS c 0,05 %-ным Tween 20 (Sigma, #P1379). Вторичные антивидовые антитела против IgE человека.

Пероксидаза (Sigma, #A9667).

Раствор субстрата (3,3′,5,5′-Тетраметилбензидин, Sigma, #T0440).

Результаты работы, выводы

В исследуемых сыворотках наблюдался низкий уровень специфических антител к Pru p 3 персика и Fra a 3 клубники, что свидетельствует о том, что аллергические заболевания у членов семей школьников − участников проекта никак не связаны с липид-транспортирующими белками растений.

В сыворотках пациентов в среднем наблюдался несколько повышенный уровень специфических антител к Pru p 3 персика и Fra a 3, причём почти всегда количество антител к Pru p 3 было практически таким же, как и к Fra a 3. В случае одного из образцов было обнаружено значительное превышение уровня IgE к Fra a 3.

Это могло быть связано с сенсибилизацией организма к данному белку.

Полученные данные свидетельствуют о том, что, несмотря на ведущую роль доминантного аллергена Pru p 3 персика в сенсибилизации людей к аллергенам класса LTP, этот аллерген не всегда является ключевым в развитии аллергии.

Возможно, в Московском регионе этот аллерген не играет такой доминирующей роли в сенсибилизации пациентов, как в странах средиземноморского бассейна. Это требует дополнительных исследований.

Перспективы использования результатов работы

Полученные данные можно использовать для расширения статистики пищевой аллергии по Московскому региону, они также могут стать основанием для проведения дополнительных исследований.

Сотрудничество с вузом/учреждением при создании работы

Работа была выполнена в Институте биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук.

Награды/достижения

Открытая городская научно-практическая конференция

«Наука для жизни» – диплом победителя.

Отчётная научно-практическая конференция «Биотехнолог – профессия будущего» – диплом призёра