Исследование цитотоксического действия солнечных очков

Актуальность

Очки предназначены для улучшения качества жизни и здоровья человека, относятся к медицинским изделиям и подлежат тщательной проверке по ГОСТу и сертификации. Не только линзы очков, но и саму оправу проверяют на содержание опасных веществ, чтобы исключить возможное негативное биологическое воздействие очков на организм человека.

Цель

Сравнения цитотоксического действия сертифицированных солнцезащитных очков и очков «no name» производства

Задачи

1. Подготовить экстракты из образцов в соответствии с рекомендациями ГОСТ ISO 10993-1-2011
2. Подготовить к исследованию культуру клеток
3. Провести контакт клеток с образцами
4. С помощью витального окрашивания клеток оценить действие экстрактов
5. Интерпретировать результаты

Описание

В работе проводилось определение цитотоксического потенциала в условиях in vitro экстрактов из изделий на культуре фибробластов мыши линии L929.

Сначала были приготовлены экстракты из образцов, экстракция длилась 24 часа. В качестве отрицательного (не цитотоксичного) контрольного образца была взята полная ростовая среда (ПРС), в качестве положительного (100% цитотоксичного) контрольного образца был взят лабораторный раствор цинка в азотной кислоте.

Фибробласты мыши линии L929 культивировали в стандартных культуральных флаконах на ПСР. Затем удаляли ПСР, и во флаконе оставались клетки. Затем клетки из флакона удаляли с помощью трипсинизации – во флакон наливали раствор Версена и диссоциирующий реагент (TrypLE^тм) для приготовления суспензии.

Пипеточным дозатором 10 мкл суспензии клеток помещали в гемоцитометр (камеру Горяева) для подсчёта количества клеток.

Суспензию клеток с необходимой концентрацией (1–2) х10⁴ клеток/мл – для посева в культуральный 96-луночный плоскодонный планшет. Инкубация проводилась в течение 24 часов при температуре 37 ^°С во влажной атмосфере.

Контакт с образцами

1. Экстракты предварительно стерилизовали с помощью фильтрационной насадки на шприц с размером пор 0,22 мкм.
2. 100 мкл стерильного экстракта вносили в каждую лунку (см. схему).
3. Планшеты с экстрактами образцов инкубировали в течение 24 ч. при температуре 37 °С во влажной атмосфере.

Уровень конфлюэнтности монослоя и отсутствие контаминации оценивали с помощью бинокулярного инвертированного флуоресцентного микроскопа при увеличении х100.

Жизнеспособность клеток после контакта с образцами оценивали через 24 часа с помощью набора LIVE/DEAD, который позволяет одновременно определять живые и мёртвые клетки посредством двойного флуоресцентного окрашивания. Флуоресценцию оценивали с помощью микроскопа.

Результаты работы/выводы

1. Проведённые исследования показали, что солнцезащитные очки производства Polaroid Eyewear (Швейцария) и солнцезащитные очки «no name» производства не оказывают цитотоксического действия на культуру фибробластов мыши линии L929.
2. Образцы очков, использованные в нашем исследовании, прошли исследование на цитотоксичность и могут быть использованы в повседневной жизни.

Сотрудничество с вузом/учреждением при создании работы

ФГБУ «НМИЦ ТИО им. В.И. Шумакова»