Стандартизация биологически активных добавок на основе экстракта Босвеллии (boswellia serrata) методом ВЭЖХ-УФ

Актуальность

На данный момент перспективным направлением является изучение традиционных лекарственных растений. Современные научные дисциплины позволяют обосновать позитивное влияние фитотерапии. Поэтому всё чаще в продажу поступают препараты, в составе которых имеются экстракты лечебных трав и растений. Чаще всего они выпускаются под обозначением «биологически активная добавка». Однако из-за отсутствия проработанной нормативной базы в России сертификация БАД не производится надлежащим образом. Регистрация препарата в качестве биологически активной добавки к пище намного проще и быстрее регистрации лекарственного средства (2−3 месяца против 9 и более). Регулирование гораздо мягче и производится через Роспотребнадзор, что делает БАД более привлекательными для производителя. Контроль за качеством выпускаемых и реализуемых товаров низок (из 14088 проб, исследованных в 2011 году, только 10,8 % исследовано на показатели подлинности). Именно поэтому актуальным становится вопрос стандартизации активных веществ в БАД. Для своих исследований мы выбрали препараты на основе экстракта boswellia serrata, поскольку на данный момент интерес специалистов и рядовых потребителей к препаратам на основе босвеллии заметно вырос.

Цель

Разработка методики количественного определения экстракта boswellia serrata в биологически активных добавках.

Задачи

1. Изучение литературного материала

2. Подбор оптимального метода для анализа

3. Отработка и оптимизация условий анализа, выбор соединений-маркеров

4. Анализ ряда коммерчески доступных биологически активных добавок

5. Подведение итогов и обсуждение результатов

Содержание работы

Разделение проводили на жидкостном хроматографе Acella 600 (Thermo Scientific, США). Прибор состоял из градиентного насоса, онлайн-дегазатора подвижной фазы, автосемплера, термостата колонки, диодно-матричного и масс-спектрометрического детектора. Регистрацию хроматограмм проводили при длине волны 254нм. Настройки масс-спектрометрического детектора были выставлены согласно рекомендациям производителя. Ионизацию проводили с использованием источника электрораспылительной ионизации, регистрировали отрицательные ионы в диапазоне 400−600m/z.

Экстракцию из образцов проводили с использованием ультразвуковой бани Elma (Латвия).

Для фильтрования полученных образцов перед вводом в прибор использовали насадочные фильтры из нейлона с диаметром пор 0,45 мкм (Teknokroma).

Для анализа использовали следующие реактивы: трифторуксусная кислота (Panreac, Испания), ацетонитрил качества HPLC gradient grade (Merck, Германия), метанол HPLC grade (Merck, Германия).

Стандартный образец экстракта босвеллии производства Sigma Aldrich, каталожный номер 1076250, Lot № F0J024.

Исследуемые препараты: БАД «Артро-актив» (производитель Диод, Россия), Boswellia extract (Now Foods, США), Boswelia extract(Source Naturals®, С)

Выводы

1. Изучен литературный материал и на его основе предложен метод стандартизации препаратов экстракта Boswellia serrata. Показано, что наиболее эффективным является метод жидкостной хроматографии со спектрофотометрическим детектированием.

2. Продемонстрировано, что оптимальным экстрагентом для извлечения босвеллиевых кислот из экстракта является метанол. Оптимизирован состав подвижной фазы для разделения компонентов экстракта на колонке Synergi Max-RP.

3. С использованием масс-спектрометрического детектора были идентифицированы пики четырёх основных босвеллиевых кислот по их молекулярному иону. Кето-босвеллиевая кислота была выбрана как маркер для дальнейшего определения содержания экстракта в образцах.

4. По пику кето-босвеллиевой кислоты построена градуировочная зависимость для количественного определения экстракта. Полученная зависимость линейна (R2 = 0,999) в диапазоне от 0,24 до 220 мг/мл.

5.Предложенный подход был использован на практике для определения содержании экстракта босвеллии в трёх биологически активных добавках. Показано, что во всех случаях найденное содержание экстракта в образце хорошо согласуется с данными производителя