Изменение клеточного состава грудного молока в зависимости от периода лактации и срока хранения

Цель

Изучение закономерностей изменения клеточного состава грудного молока.

Описание

По данным ВОЗ, основным фактором, влияющим на здоровье человека, является его образ жизни, в том числе питание. Для развивающегося детского организма здоровое питание особенно важно. Лучшей его формой для ребёнка грудного возраста, согласно рекомендациям ВОЗ, является материнское молоко. Оно имеет уникальный состав, служит источником всех необходимых ребёнку питательных веществ и содержит большое количество защитных факторов, в том числе клеток. Они обеспечивают пассивный иммунитет и дальнейшее развитие собственного иммунитета ребёнка.

Гипотеза

Клеточный состав грудного молока в разные периоды лактации различается.

Разные типы клеток молока при хранении погибают с разной скоростью.

Задачи

1. Подбор метода окрашивания клеток молока.

2. Освоение методики подсчёта и анализа клеток.

3. Исследование клеточного состава грудного молока в зависимости от стадии лактации.

4. Исследование клеточного состава грудного молока в зависимости от срока его хранения.

Изучением клеточного состава грудного молока занимаются наиболее углублённо в течение последних нескольких десятилетий. Тем не менее, в большинстве этих работ исследуются клетки грудного молока на ранних стадиях лактации, и практически не затрагивается тема его клеточного состава на стадии зрелой лактации и лактации после года. Имеются расхождения в оценке количества клеток в грудном молоке. Кроме того, не проводился анализ клеточного состава грудного молока в зависимости от длительности хранения.

В работе был исследован клеточный состав грудного молока ранней и зрелой лактации, а также проанализировано изменение его клеточного состава при хранении.

Было исследовано молоко, полученное методом сцеживания от кормящих матерей на разных стадиях лактации, и от матерей, прекративших кормление. Всего исследовано 26 проб молока у 26 матерей. В молоке определяли концентрацию клеток различных типов, подсчитывая в каждой пробе не менее 100 клеток.

Для окрашивания клеток молока были использованы два метода: по Романовскому и по Хилькевичу.

Концентрацию клеток (С) определяли по формуле C=5000·n/m, где n – число клеток в m больших квадратах камеры Горяева.

Для определения количества погибших клеток смешивали 0,4 мл физиологического раствора, 20 мкл молока и 0,1 мл 0,4 %-ного раствора трипанового синего. Смесь помещали на предметное стекло. Под микроскопом (окуляр 10х, объектив 40х) подсчитывали число погибших клеток (b) (с окрашенным ядром) и живых клеток (c) (с неокрашенным ядром). Долю живых клеток (a) рассчитывали по формуле: a = с/(b+c) %. Общее число клеток составляло не менее 100. Число живых клеток в 1 мл молока (N) рассчитывали по формуле: N = an.

Типы клеток определяли в соответствии с атласом по гематологии. Рассчитывали клеточную формулу (процент числа каждого типа клеток), подсчитывая не менее 100 клеток в каждом препарате. Некоторые пробы молока хранили в течение 8 дней при температуре +4 °С. Ежедневно измеряли концентрацию живых клеток и определяли клеточную формулу.

Оснащение и оборудование, использованное в работе

• Микроскоп

• Камера Горяева

• Предметные стёкла

• Пробирка

• Дозаторы пипеточные лабораторные

• Видеокамера для микроскопа

• Компьютер

• Центрифуга

• Холодильник

Результаты

1. В ходе исследования в грудном молоке обнаружено семь типов клеток, основные из которых – лимфоциты, пенистые клетки и нейтрофилы. Реже встречаются моноциты. Активные макрофаги, базофилы и эпителиальные клетки обнаруживаются редко и, вероятно, попадают в молоко случайно.

2. Наибольшая концентрация клеток в молоке наблюдается в молозиве и при прекращении кормления (2–29 тысяч клеток/мл). Повышенное содержание клеток в эти периоды в большой степени связано с пенистыми клетками. В переходном и зрелом молоке концентрация клеток существенно меньше (80–700 клеток/мл). В основном, это лимфоциты и нейтрофилы, реже – моноциты. Изменения концентрации какого-либо типа клеток в переходном и зрелом молоке в зависимости от срока кормления не обнаружено.

3. При хранении молока при +4 °С содержание клеток уменьшается с разной скоростью для разных клеточных типов. Среднее время жизни лимфоцитов составляет 3,2 суток, пенистых клеток – 2,1 суток, моноцитов – 1,8 суток, нейтрофилов – 1,2 суток.

Гипотеза о том, что клеточный состав грудного молока зависит от периода лактации, подтвердилась. Также подтвердилось то, что разные типы клеток грудного молока при его хранении погибают с разной скоростью.

Перспективы использования результатов работы

Результаты исследования выявляют особенности состава грудного молока на клеточном уровне, что подтверждает преимущества грудного вскармливания как для здоровья детей, так и для здоровья молочной железы матери.

Было оценено оптимальное время хранения грудного молока, за которое его клеточный состав менее всего изменяется, что поможет предоставлять более надежную иммунную защиту детям, вскармливаемым сцеженным грудным молоком.

Сотрудничество с учреждением при создании работы

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН.

Особое мнение

«Участие в конференции «Старт в медицину» дало мне возможность провести своё первое исследование, я получила важный опыт в сфере публичных выступлений. Проект «Медицинский класс в московской школе» помог мне определиться с выбором будущей профессии, благодаря ему я получила первые базовые знания в области медицины и углублённые − в области естественных наук»