Моноклональные антитела как современный подход к изучению вируса гепатита C
Работа призёра открытой городской научно-практической конференции «Курчатовский проект – от знаний к практике, от практики к результату» в секции «Поиск» среди работ учащихся 10−11 классов |
Направление работы: Биотехнология
Авторы работы: ГБОУ Школа имени Маршала В.И. Чуйкова
Email: Написать
Предметы: Биология
Классы: 11 класс
Мероприятия: Открытая городская научно-практическая конференция «Курчатовский проект – от знаний к практике, от практики к результату» 2020 года
|
Актуальность
Вирус гепатита С (ВГС) является одной из наиболее актуальных проблем современности. Это заболевание имеет широкую распространенность: по данным ВОЗ хронической инфекцией гепатита С страдают около 70 миллионов человек во всем мире и примерно 399 000 человек ежегодно умирают от этого заболевания. Именно поэтому, изучение белков ВГС имеет огромное значение для диагностики и лечения данного заболевания.
Одним из методов исследования является иммуноферментный анализ (ИФА), ключевыми реагентами которого являются моноклональные антитела (МКА). Моноклональные антитела — это класс антител, которые обладают высокой селективностью в отношении молекулярной мишени (конкретному эпитопу антигена), являющейся, как правило, одним из ключевых компонентов патологического процесса. В основу реакции положено классическое взаимодействие антигена с антителом.
Цель
Изучение свойств МКА 3F11 и 6B11 к рекомбинантному неструктурному белку rNS4 ВГС.
Задачи
- Определить эффективность работы моноклонального антитела 3F11 (по сравнению с 6B11) методом ИФА.
- Определить возможность его использования в исследованиях, направленных на изучение рекомбинантного неструктурного белка rNS4 ВГС.
Оснащение и оборудование, использованное при создании работы
- Рекомбинатный белок NS4
- Мышиные моноклональные антитела
- Конъюгат (козьи антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена)
- Субстрат
- Стоп-реагент
- Казеин для разведения
- PBS×1 (однократный соляной буфер)
- PBSTw20 (соляной буфер с содержанием твина-20 в концентрации 0,1 %)
- Микропланшет
- Многоканальный семплер
- Термостат
- Микропланшетный спектрофотометр (ИФА-ридер)
Описание
- Сорбция рекомбинантного белка.
Рекомбинантный белок rNS4 засорбировала в разведении 1:500{2} и 1:2000{1} для 3F11 и 1:500{2} 6B11 по 50 мкл/лунку 96-луночного микропланшета с использованием PBSх1 (однократного фосфатно-соляного буфера).
Инкубация проводилась при комнатной температуре в течение ночи.
- Отмывка после сорбции.
Отмывка необходима для удаления несвязавшихся компонентов и проводилась путем внесения PBSTw20 (фосфатно-соляного буфера с содержанием твина-20 в концентрации 0,1%) в объеме 250 мкл/лунку. Панель отмывала вручную в течение 3 мин, затем содержимое лунок сбрасывала. Процедуру повторяла 4 раза.
- Титрование и внесение моноклональных антител 6B11 и 3F11
- Инкубация
Проводилась при температуре +37°C в термостате в течение 1 часа. Планшет закрывался крышкой для предотвращения испарения и кантаминирования.
- Повторная отмывка
Необходима для удаления первичных антител, не связавшихся с антигенами.
- Внесение конъюгата.
В качестве конъюгата я использовала вторичные козьи антитела, соединённые с пероксидазой хрена в разведении 1:500 по 50 мкл/лунку с использованием казеина.
- Инкубация
Проводилась при температуре +37°C в термостате в течение 1 часа. Планшет закрывался крышкой.
- Отмывка несвязавшихся вторичных антител.
- Внесение субстрата.
- Инкубация
Проводилась при комнатной температуре в темноте в течение 30 минут.
- Внесение стоп-реагента по 50 мкл/лунку.
- Учет результатов на микропланшетном анализаторе.
Для определения рабочей концентрации МКА 6B11 и 3F11 были построены графики с помощью программы Microsoft Excel.
Результаты работы/выводы
- Результаты по МКА 6В11 в разведении 10 мкг/мл являются более достоверными, чем результаты по МКА 3F11 в том же разведении, поэтому эффективней использовать МКА 6B11.
- Это дает основание говорить о том, что в лабораторной и клинической практике для обнаружения белка NS4 ВГС в дальнейшем будет применяться моноклональное антитело 6B11.
Перспективы использования результатов работы
Возможность дальнейшего использования моноклонального антитела МКА 6В11 в фундаментальных исследованиях, направленных на борьбу с вирусом гепатита С.
Сотрудничество с вузом/учреждением при создании работы
ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина.
Награды/достижения (в каких конкурсах и с какими результатами выставлялась ранее эта работа)
«Курчатовский проект — от знаний к практике, от практики к результату» — призёр.
XXIX Всероссийская конференция одаренных школьников "Авангард" – диплом 3 степени.
Мнение автора
«Работа помогла на практике познакомиться с методом иммуноферментного анализа, освоить некоторые приемы и получить навыки лабораторных исследований»